【胆固醇检测】

目前，有关食品中胆固醇的测定方法主要有气相色谱法，高效液相色谱法，比色法。这些方法都可以完成胆固醇的检测，但样品基质复杂，目标物含量低导致分析结果不理想，而采用凝胶渗透色谱法（GPC）对样品进行前处理，可以有效解决上述问题。

凝胶渗透色谱法采用惰性多孔材料为固定相，利用空间排阻效应将分子大小不同的物质分离，达到制备纯化的目的。本文采用全自动凝胶净化系统，提取目标物胆固醇，用高效液相色谱仪进行测定，从而建立一个简单，快捷，准确的食用油中胆固醇的测定方法。

【试剂】

1.胆固醇标品（99%）

2.甲醇（HPLC）

3.乙酸乙酯（分析纯）

4.环己烷（分析纯）

5.石油醚（分析纯）

6.水（超纯水）

【仪器设备】

1.SGPCS-凝胶净化系统

2.凝胶渗透色谱柱

3.LC10高效液相色谱仪（等度）

4.旋转蒸发仪

【含量测定】

标准溶液制备

准确称取胆固醇标准品0.05g，用无水乙醇溶解并定容至 50ml作为标准储备液放置0~4℃冰箱中备用。

胆固醇标准溶液：分别吸取标准储备液(1.0mg/ml)25ul、50ul、100ul、500ul、2000ul，用无水乙醇定容至10ml，现配现用。

试样的制备

分别称取0.5g植物油和0.5g鲜奶，用等体积混合的环己烷和乙酸乙酯混合溶剂定容至5ml，供后续分离净化使用。抽取试样注入凝胶净化系统，流动相：等体积混合的环己烷和乙酸乙酯溶液，流速：5ml/min,收集7.5-16.5min馏分于试剂瓶中，然后移至旋转蒸发仪中蒸发至干，加入5ml乙醇溶解，供HPLC检测用。

【色谱条件】

色谱柱:C18  250mm*4.6mm  粒度5um

流动相：乙醇

流速：1.0ml/min

紫外检测器波长：208nm

【谱图】